Réparation des lésions épithéliales de l’auricule et du conduit auditif par greffe d’agrégats de cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux et de matrice extracellulaire
Introduction
L’exérèse chirurgicale constitue le traitement principal de diverses affections auriculaires, incluant les déformations congénitales ou acquises de l’atrésie de la conque, les tumeurs malignes du conduit auditif externe et les maladies inflammatoires chroniques de la caisse du tympan. Cependant, ces interventions génèrent fréquemment des pertes de substance cutanée conchale et une exposition de la cavité mastoïdienne osseuse à l’environnement extérieur. La cicatrisation complète dépend de la régénération épidermique. Un retard d’épithélialisation entraîne otorrhée prolongée, surinfection et formation de tissu granuleux, compromettant le pronostic fonctionnel et la qualité de vie. Les études cliniques rapportent une absence ou une lenteur d’épithélialisation pré-infectieuse chez près d’un tiers des patients.
Diverses techniques ont été essayées : greffes cutanées épaisses, lambeaux de fascia périosté temporal, pâte osseuse ou phosphate tricalcique bêta, avec des résultats décevants. L’ingénierie tissulaire utilisant cellules, matrices et facteurs de croissance montre un potentiel pour accélérer la régénération cutanée, mais se heurte à des limites : délais de fabrication, fragilité des feuillets cellulaires, faible taux de succès transplantatoire et vascularisation insuffisante.
Cette étude évalue l’application combinée d’agrégats de cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux (CSMTA) et de matrice extracellulaire (MEC) dans un modèle murin de plaie cutanée transfixiante. Les CSMTA sécrètent des médiateurs de cicatrisation, présentent une faible immunogénicité allogénique et une expansion aisée in vitro. Les MEC, déjà utilisées en réparation tissulaire, offrent un support mécanique et pro-angiogénique.
Méthodes
Approbation éthique
L’étude respecte la Déclaration d’Helsinki et a été approuvée par le Comité d’éthique de l’Université de médecine militaire de Quatrième (N° licence : SCXK 2007-007).
Isolation et culture des CSMTA
Le tissu adipeux inguinal de lapins néo-zélandais âgés de 2 semaines a été digéré par collagénase de type I, puis centrifugé. Les cellules ont été cultivées en MEM α supplémenté de SVF, glutamine et antibiotiques à 37°C sous 5% CO2.
Caractérisation des CSMTA
La phénotypage par cytométrie en flux (marqueurs CD90+, CD29+, CD14-, CD45-), les tests de prolifération (MTT) et de différenciation ostéogénique/adipogénique ont confirmé leur nature mésenchymateuse.
Préparation des agrégats CSMTA-MEC
Des MEC de 15 mm dérivées de péritoine porcin décellularisé ont été ensemencées avec des CSMTA. L’adhésion cellulaire et la formation de feuillets ont été vérifiées par microscopie électronique et confocale.
Analyse de la sécrétion de facteurs de croissance
La surexpression des ARNm de TGF-β, HGF et EGF a été quantifiée par qPCR, et leurs protéines par western blot.
Modèles de plaies cutanées
Des lésions transfixiantes de l’auricule et du conduit auditif ont été créées chez des lapins répartis en trois groupes : CSMTA-MEC, MEC seule et témoin. La cicatrisation a été évaluée par observation clinique, histologie (H&E) et indice d’élévation cicatricielle.
Résultats
Caractérisation des CSMTA
Les cellules présentaient une morphologie fusiforme typique, une croissance exponentielle en 5-6 jours et une capacité de différenciation confirmée.
Interaction CSMTA-MEC
La microscopie a révélé une adhérence cellulaire optimale sur les MEC, avec augmentation du taux de cellules en phase S (+27% vs témoin). L’expression des facteurs de croissance était majorée de 2 à 4 fois.
Cicatrisation du conduit auditif
À 4 semaines, le groupe CSMTA-MEC présentait une régénération cutanée complète avec architecture normale, contre une couverture partielle dans les autres groupes. Les taux de bFGF, VEGF et TGF-β1 étaient significativement plus élevés dans les groupes actifs.
Cicatrisation de l’auricule
Le taux de cicatrisation à 2 semaines était de 69,02±6,36% (CSMTA-MEC) vs 43,74±12,15% (témoin). L’indice cicatriciel à 7 semaines était réduit de 50% dans le groupe CSMTA-MEC (2,08±0,87 vs 4,06±0,45), avec une maturation histologique accélérée de 4 semaines.
Discussion
Cette étude démontre la supériorité des agrégats CSMTA-MEC pour la réépithélialisation auriculaire et méatique. La synergie entre la sécrétion paracrine des CSMTA et les propriétés biomécaniques de la MEC crée un microenvironnement propice à l’angiogenèse et à la différenciation épidermique. La réduction du remodelage cicatriciel s’explique par une régulation optimale de la balance MMP/TIMP et de la réponse macrophagique.
Comparativement aux techniques utilisant des kératinocytes autologues ou des lambeaux muqueux, cette approche évite les morbidités de site donneur et les problèmes éthiques liés aux cultures cellulaires complexes. La décellularisation préservant l’architecture collagénique native de la MEC semble cruciale pour guider la réorganisation tissulaire.
Conclusion
Les agrégats CSMTA-MEC représentent une stratégie prometteuse pour la réparation des pertes de substance post-chirurgicales en otologie. Leur capacité à induire une régénération cutanée fonctionnelle avec minimisation des cicatrices ouvre des perspectives cliniques pour la couverture des cavités mastoïdiennes exposées.
doi.org/10.1097/CM9.0000000000000125