La répression de Smad3 par la silencing de Robo1 atténue la transition épithélio-mésenchymateuse dans la sténose trachéobronchique
La sténose trachéobronchique est une pathologie rare mais cliniquement importante, caractérisée par une fibrose des voies aériennes pouvant entraîner une morbidité et une mortalité significatives. L’épithélium, première ligne de défense contre les agressions environnementales, joue un rôle clé dans le maintien de l’intégrité des voies respiratoires. Lors de lésions, les cellules épithéliales subissent une transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), processus impliquant la perte des jonctions intercellulaires, une réorganisation du cytosquelette et une motilité accrue. Bien que la TEM soit essentielle à la réparation tissulaire, sa réactivation inappropriée est associée à la fibrose, marquée par la diminution de marqueurs épithéliaux (E-cadhérine) et la surexpression de marqueurs mésenchymateux (N-cadhérine, vimentine, α-SMA).
Le TGF-β1, médiateur clé de la fibrose, active principalement la voie Smad. L’upregulation de Smad3 favorise la migration cellulaire et la TEM. Cependant, le rôle de la voie Slit-Robo, notamment du récepteur Robo1, dans la réparation pathologique de la sténose trachéobronchique reste inexploré. Cette étude examine l’implication de Robo1 dans la TEM et son potentiel thérapeutique.
Des tissus de granulation trachéale de patients et des tissus sains (cancer du larynx) ont été prélevés. Un modèle murin de fibrose trachéale a été établi avec des rats Sprague Dawley divisés en groupes contrôle et modèle. Le protocole a été approuvé par le Comité d’Éthique du Premier Hôpital Affilié de l’Université Médicale de Chongqing. Des cellules BEAS-2B (épithéliales bronchiques) ont été traitées avec du TGF-β1 recombinant, du Slit2 recombinant et l’inhibiteur SB431542. Le silencing de Robo1 a été réalisé via des shRNA lentiviraux.
Les analyses histologiques (H&E, trichrome de Masson) ont révélé une infiltration inflammatoire, un épaississement de la lamina propria et une augmentation des dépôts de collagène dans le groupe modèle. L’immunohistochimie a montré une expression accrue de Robo1 dans les tissus de granulation. Les ARNm et protéines de Robo1 étaient significativement surexprimés dans les modèles humains et murins. Dans les cellules BEAS-2B, le TGF-β1 a induit une augmentation dose-dépendante de Robo1 et de la prolifération cellulaire (pic à 10 ng/mL).
Le silencing de Robo1 a réduit l’expression des marqueurs mésenchymateux (N-cadhérine, vimentine, α-SMA) et restauré l’E-cadhérine. L’immunofluorescence a confirmé que le TGF-β1 augmente Robo1 et diminue l’E-cadhérine, effets atténués par le silencing. Ce dernier a inhibé la phosphorylation de Smad3 (p-Smad3) sans affecter Smad3 total, indiquant un rôle central de la voie canonique Smad3.
Le traitement par Slit2 a potentialisé l’expression de Robo1 induite par le TGF-β1, atténuant partiellement les effets de SB431542 sur la TEM et p-Smad3. SB431542 a inhibé l’expression de PI3K/AKT phosphorylés, légèrement restaurée par Slit2. Ces résultats suggèrent que Slit2-Robo1 module la TEM via les voies canoniques et non canoniques du TGF-β1.
En conclusion, cette étude identifie Robo1 comme cible thérapeutique prometteuse dans la sténose trachéobronchique. Son inhibition atténue la TEM en supprimant la voie p-Smad3. Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour élucider les interactions entre Slit2-Robo1, les srGAPs et MYO9B dans différents types cellulaires.
DOI : 10.1097/CM9.0000000000002528